Качественный анализ на гепатит C: расшифровка

Анализ крови на гепатит С (HCV) количественно, ПЦР

HCV количественно ПЦР – это анализ, определяющий концентрацию враждебных организму частиц-носителей инфекционного заболевания гепатит С. Анализ основан на молекулярном методе полноразмерной цепной реакции, сокращённо ПЦР.

Подготовка к исследованию:

• Забор биоматериала производится в утренее время, необходимое условие – натощак
• Рекомендуется взятие крови не ранее чем через 4 часа после последнего приема пищи

Тип биоматериала: венозная кровь

Синонимы (rus): Определение РНК вируса гепатита С, количественный анализ на гепатит С, РНК вируса гепатита С количественный

Синонимы (eng): HCV RNA

Методы исследования: полимеразная цепная реакция

Единицы измерения: МЕ/мл

Сроки выполнения: 3-5 дней

Определение анализа на гепатит С

Анализ определяет количественную вирусную нагрузку в крови, количество единиц измерения вируса на определенное количество биоматериала. Анализ выявляет наличие возбудителя вируса гепатита C, сокращенно ВГС.

Определяется наличие генетического кода вируса (РНК) и его концентрацию. Положительный анализ показывает не только наличие заболевания (как это делает качественный анализ), но и размножение клеток вируса, и его динамику в процессе протекания болезни и ее лечения. Расшифровкой анализа занимаются профильные специалисты – врач-инфекционист или более узкая специализация – врач-гепатолог.

Противопоказанием к проведению анализа являются прием пищи не менее чем за 7-8 часов до забора биоматериала, загрязненный биоматериал, содержание гепарина в крови, наличие ингибиторов белкового или химического происхождения в биоматериале.

В каких случаях делают анализ на гепатит С?

Количественное исследование на гепатит C проводят для определения стратегии и программы лечения гепатита. На момент назначения анализа уже определено, что пациент болен гепатитом C, с помощью данного анализа выясняется, насколько велика вирусная нагрузка на организм. После получения результата врач-инфекционист определяет препараты для лечения и стратегию его проведения.

В процессе лечения вируса количественный анализ проводится для определения эффективности лечения и динамики изменения концентрации вируса в крови пациента.

Расшифровка результатов анализа

В советской и впоследствии в российской медицине принято было изменять вирусную нагрузку в количестве копий вируса на моль крови (копий/моль), в международной практике – международные единицы на миллилитр (МЕ/мл). Эти два стандарта сопоставимы, 1 МЕ/мл примерно равен 4 копии/мл. В крови либо не обнаруживается вирус (результат «не обнаружено»), либо количественное определение концентрации. Показатель менее 15 МЕ/мл сомнителен, находится ниже уровня чувствительности теста, рекомендовано повторить анализ. Результат 15 до 43 МЕ/мл должен быть описан врачами с учетом клинической картины исследуемого пациента. Однозначно достоверный положительный результат может объявляться при получении концентрации 43 до 6,90 Е7 МЕ/мл, означает заболевание человека гепатитов С и является показателем к интенсивному лечению.

Инфицирование

Инфекция острого гепатита C передается путем попадания зараженной крови в кровоток здорового человека. Такой путь передачи называется парентеральным. В зоне высокого риска заражения находятся люди, которые могут контактировать с потенциально инфицированной кровью. Это сотрудники медицинских лабораторий, пациенты, требующие переливание крови, трансплантацию органов, а также находящиеся на диализе.

В салонах красоты (предоставляющих услуги пирсинга, тату, маникюра и т.д.), а также стоматологических кабинетах все манипуляции должны происходить в санитарных условиях с использованием стерильных инструментов, так как HCV может попасть в организм через загрязненные инструменты.

Отдельно следует выделить наркозависимых людей. Многократное использование одного шприца с иглой разными лицами в разы повышает риск инфицирования. Именно наркоманы составляют большую часть больных гепатитом C и являются переносчиками вируса HCV.

В бытовых условиях инфекция может распространяться через личные средства гигиены: зубные щетки, бритвенные принадлежности.

Все способы передачи инфекции, кроме контакта с кровью, называются общим словом непарентеральный путь заражения. Таким способом гепатит C передается крайне редко, что связано с малой концентрацией вируса. Половой путь передачи составляет не более 10% случаев заражения. Передача вируса с молоком кормящей матери относится к единичным случаям.

Всем, кто находится в группе повышенного риска заражения, а также тем, кто имел неосторожность контактировать с инфицированной кровью, рекомендуется сдать анализы крови на выявление HCV.

Особенности количественного анализа

Количественный анализ методом ПЦР проводится для определения вирусной нагрузки. Под этим термином подразумевают количество копий РНК возбудителя в 1 мл крови.

Благодаря такому исследованию врач сможет оценить ряд факторов, играющих ключевую роль как в самом течении заболевания, так и исходе терапии. Это:

• вероятность развития осложнений (цирроза и гепатоцеллюлярной карциномы), так как чем активнее патологический процесс, тем выше риск появления патологий печени уже на начальных стадиях гепатита С;
• эффективность стандартной схемы терапии (в тяжелых случаях требуется дополнительное назначение противовирусных средств);
• риск для окружающих (особенно если пациент относится к социально благополучным слоям населения, имеет семью, детей);
• риск внепеченочных осложнений (развитие аутоиммунных заболеваний, поражения нервной, сердечно-сосудистой системы и т.д.).

Количественное определение РНК HCV важно и для контроля эффективности проводимого лечения. По мере продолжения приема противовирусных средств полученные цифры снижаются. Целью терапии является достижение отрицательного результата качественного анализа методом ПЦР.

Показания

До появления большого количества частных лабораторий, где пациент может сдать практически любой анализ без документов от врача, направление на выполнение количественной ПЦР давали на определенном этапе диагностики или лечения.

В соответствии с нормами и протоколами ВОЗ, показаниями к проведению такого исследования служат:

• положительные серологические маркеры HCV (anti-HCV Total, наличие иммуноглобулинов класса G и/или М);
• положительный результат качественной ПЦР;
• контроль проводимого лечения.

При желании пациент может самостоятельно обратиться в частную клинику и выполнить подобное исследование. Но при отсутствии гепатита С проведение такого лабораторного теста считают нецелесообразным.

Нам каких этапах заболевания проводится

Для определения вирусной нагрузки установлены следующие сроки:

• до начала терапии (возможно, одновременно с генотипированием);
• 4 неделя лечения (отрицательные данные свидетельствуют о быстром вирусологическом ответе и служат предикторами благоприятного исхода);
• последняя неделя терапевтического курса (12 или 24 в зависимости от подобранной схемы), негативный результат подтверждает эффективность терапии, позитивный требует продолжения лечения, но уже с применением других медикаментов;
• 24 и 48 неделя после окончания лечебного курса (вне зависимости от его продолжительности), отсутствие вирусной нагрузки подтверждает выздоровление.

Дополнительно исследование проводят только по показаниям (например, ухудшение самочувствия, ошибки в приеме таблеток, выявление сопутствующих инфекций и т.д.). Выполнение ПЦР не исключает необходимости в других анализах – клинических исследованиях крови и мочи, печеночных проб, УЗИ и прочих.

Качественный и количественный анализ ПЦР на гепатит С: отрицательный, положительный, расшифровка. Гепатит с антитела есть пцр отрицательный

ПЦР гепатит С имеет и другое название – РНК-анализ. Такое название объясняется тем, что в вирусе присутствует частичка РНК. Этот микроорганизм способен мутировать.

Все генотипы вируса характеризуются дифференциальной резистентностью, именно поэтому каждому пациенту назначаются разные методы терапии и в каждом индивидуальном случае дальнейший прогноз может отличаться.

В качестве исследуемого материала выступает кровь из вены. ЕЕ нужно сделать на голодный желудок. Обычно тестирование осуществляется методом Real-Time PCR, но также может использоваться тест COBAS AMPLICOR. В не зависимости от выбранного типа исследования крайне важно учесть порог чувствительности, то есть возможность реагента определить саму малую концентрацию вирусных частиц в крови.

Если показатели нормальные, то в расшифровке теста будет указано “не найдено”.

Виды анализа на гепатит С методом ПЦР

Составляющие анализа:

• количественный анализ;
• качественный;
• генотропирование.

Благодаря тесту можно выявить генетику вирусной инфекции, а также стадию его развития в организме пациента. В зависимости от того, насколько система диагностики чувствительна, анализ моет проводиться либо один раз либо несколько – для подтверждения результата, используя более чувствительный реагент.

Генотропирование

Так как HCV имеет высокую активность в плане мутации, при проведении теста необходимо определить, какой генотип вируса присутствует у больного в крови. Существует 11 генотипов вируса гепатита С, они также делятся на разные субтипы.

Следует помнить о том, что данный этап анализа крайне важен, потому что благодаря нему доктор может сделать выводы об фазе вируса, назначить подходящее лечение, а также выписать пациенту наиболее эффективные препараты.

Различные генотипы HCV поддаются лечению по-разному. К примеру, чтобы вылечить первый генотип потребуется более года, а эффективность такой терапии примерно 65%. А вот генотип 2 и 3 можно вылечить за полгода, при этом эффективность терапии значительно выше – примерно 90%.

Также следует отметить, что благодаря генотипироанию можно также понять, в каком состоянии находится печень. К примеру, часто генотип 3 протекает совместно с стеатозом, который способствует накоплению жира в клетках печени.

Анализ крови на ПРЦ способен определить генотип заболевания. В некоторых случаях тестовые системы не могут определить вирус. В таком случае можно получить результат “не типируется”. Подобный результат анализов говорит о том, что генотип вируса не характерен для определенной территории. В подобных случаях нужно провести повторные анализы но уже с высшим пороком чувствительности.

Расшифровка анализа ПЦР на гепатит С

Вся расшифровка анализов основана на сведениях полученных ранее. Благодаря лабораторным исследованиям в большинстве случаев обозначаются такие данные:

• тест обычно называется Real-time;
• обозначается цифра генотипа;
• к-во фракций с РНК;
• найдено или не найдено.

Самым важным при расшифровке данного анализа есть пункт под номером 3. Он позволяет увидеть вирусную нагрузку, от которой зависит продолжительность лечебных процедур, и дальней шее состояния пациента, а также его время его выздоровления.

Результаты исследований показывают цифру генотипа а также иногда можно увидеть латинскую букву, которая является определителем субгенотипа вируса. Чтобы доктор мог поставить правильный диагноз и назначить лечение ему необходимо знать генотип заболевания, этого будет достаточно для проведения дальнейших действий.

Интерпретация результатов:

Референсные значения (вариант нормы):

ПараметрРеференсные значенияЕдиницы измерения

РНК HCV (качественное ультрачувствительное исследование)	Не обнаружено

Особенности количественного анализа

Количественный анализ методом ПЦР проводится для определения вирусной нагрузки. Под этим термином подразумевают количество копий РНК возбудителя в 1 мл крови.

Благодаря такому исследованию врач сможет оценить ряд факторов, играющих ключевую роль как в самом течении заболевания, так и исходе терапии. Это:

• вероятность развития осложнений (цирроза и гепатоцеллюлярной карциномы), так как чем активнее патологический процесс, тем выше риск появления патологий печени уже на начальных стадиях гепатита С;
• эффективность стандартной схемы терапии (в тяжелых случаях требуется дополнительное назначение противовирусных средств);
• риск для окружающих (особенно если пациент относится к социально благополучным слоям населения, имеет семью, детей);
• риск внепеченочных осложнений (развитие аутоиммунных заболеваний, поражения нервной, сердечно-сосудистой системы и т.д.).

Количественное определение РНК HCV важно и для контроля эффективности проводимого лечения. По мере продолжения приема противовирусных средств полученные цифры снижаются. Целью терапии является достижение отрицательного результата качественного анализа методом ПЦР.

Показания

До появления большого количества частных лабораторий, где пациент может сдать практически любой анализ без документов от врача, направление на выполнение количественной ПЦР давали на определенном этапе диагностики или лечения.

В соответствии с нормами и протоколами ВОЗ, показаниями к проведению такого исследования служат:

• положительные серологические маркеры HCV (anti-HCV Total, наличие иммуноглобулинов класса G и/или М);
• положительный результат качественной ПЦР;
• контроль проводимого лечения.

При желании пациент может самостоятельно обратиться в частную клинику и выполнить подобное исследование. Но при отсутствии гепатита С проведение такого лабораторного теста считают нецелесообразным.

Нам каких этапах заболевания проводится

Для определения вирусной нагрузки установлены следующие сроки:

• до начала терапии (возможно, одновременно с генотипированием);
• 4 неделя лечения (отрицательные данные свидетельствуют о быстром вирусологическом ответе и служат предикторами благоприятного исхода);
• последняя неделя терапевтического курса (12 или 24 в зависимости от подобранной схемы), негативный результат подтверждает эффективность терапии, позитивный требует продолжения лечения, но уже с применением других медикаментов;
• 24 и 48 неделя после окончания лечебного курса (вне зависимости от его продолжительности), отсутствие вирусной нагрузки подтверждает выздоровление.

Дополнительно исследование проводят только по показаниям (например, ухудшение самочувствия, ошибки в приеме таблеток, выявление сопутствующих инфекций и т.д.). Выполнение ПЦР не исключает необходимости в других анализах – клинических исследованиях крови и мочи, печеночных проб, УЗИ и прочих.

Что же делать

Человек, который получил положительный результат теста на анти-ВГС, должен поговорить с врачом о последующем тестировании. Однако в большинстве случаев врачи подтверждают положительные результаты теста на анти-ВГС с помощью тестов ПЦР.

Человек, получивший отрицательный результат теста на ПЦР РНК ВГС, не имеет активной инфекции гепатита С. Ему не нужно дальнейшее тестирование или лечение. Положительный результат ПЦР-теста на РНК ВГС указывает на активную инфекцию гепатита С. Тогда врач представит варианты лечения.

Расшифровка количественного анализа на гепатит С

Обычно, когда пациент получает на руки результаты анализов, в бланке приведены показатели нормы, полученные значения и краткая интерпретация. Однако расшифровка анализа крови на гепатит С должна проводиться только врачом. Количественная ПЦР – один из этапов диагностики, поэтому врач сопоставляет приведенные цифры с полученными ранее результатами.

В зависимости от полученных показателей определяется степень вирусной нагрузки или полное отсутствие РНК HCV в организме.

Если проведен количественный анализ на гепатит С, расшифровка проводится в соответствии с таблицей:

Значение показателя	Уровень вирусной нагрузки
РНК вирус не обнаружены (либо количество копий меньше чувствительности тест-системы)	Норма, человек здоров либо анализ проведен в инкубационный период патологии
1,8×102–7,9×105 МЕ/мл	Низкая вирусная нагрузка. Указывает на недавнее инфицирование, латентное течение либо эффективность противовирусных препаратов
8×102–2,3×107 МЕ/мл	Умеренная вирусная нагрузка. Обычно отмечается при хронической форме HCV. Прогноз лечения благоприятный при условии соблюдения рекомендаций врача
2,4×107 МЕ/мл и выше	Высокая виремия. Очень вероятны тяжелые осложнения (вплоть до рака печени)

Чтобы точно расшифровать анализ и не допустить ошибочных результатов, оценивать данные количественной ПЦР можно только после выявления серологических маркеров качественной ПЦР. При ИФА обязательно указывается коэффициент позитивности. Также принимают во внимание данные ультразвукового обследования, эластографии и биопсии, если исследование проводилось.

Норма

Количественный анализ ПЦР проводят только в том случае, если положительны другие показатели крови при гепатите С.

Получение отрицательного результата возможно при:

• самостоятельном выздоровлении (в медицинской литературе приведена статистика, по которой порядка 15% случаев инфицирования HCV остаются незамеченными, иммунная система человека полностью устраняет вирус);
• раннем вирусологическом ответе (при оценке результатов в ходе противовирусной терапии);
• при ошибочных данных предыдущих исследований (маловероятно, так как предварительно обычно назначают ИФА, качественную ПЦР, печеночные пробы).

Когда сдается анализ на гепатит С для оценки вирусологической нагрузки, расшифровка проводится врачом. Считается, что показатели нормы – это полное отсутствие РНК HCV в крови. Но для исключения скрытой инфекции исследование рекомендуют повторить через несколько недель.

Какие показатели крови указывают на гепатит С

Перед началом диагностического обследования необходимо точно знать, какие показатели крови указывают на HCV. С одной стороны это позволит избежать пациенту лишних финансовых трат на ненужные анализы, с другой – сэкономит время.

Так, при гепатите С показательны такие данные:

• позитивный ИФА вне зависимости от класса обнаруженных антител; но данный параметр оценивают на фоне других результатов, так как некоторые особенности работы иммунной системы могут повлиять на правильность исследования;
• позитивная качественная ПЦР (чувствительность и специфичность метода достигает 100%);
• определение количества копий вируса при количественной ПЦР.

Косвенными признаками HCV является превышение норм печеночных трансаминаз, билирубина, лейкоцитоз, ускорение СОЭ, наличие билирубина в моче.

При расшифровке результатов принимают во внимание сокращения, как обозначается гепатит С в анализах. Обычно вирусную нагрузку указывают в МЕ/мл или IU/ml, а РНК вируса английской аббревиатурой RNA HCV.

Бывает ли ложный тест

В отличие от ИФА вероятность ложного результата ПЦР практически нулевая. Ошибки возможны только в результате человеческого фактора, то есть при нарушении правил забора крови, хранения образцов и непосредственно проведении исследования.

Как правильно сдавать анализ

Проверяться болезни печени нужно всем при смене полового партнера, наступления гестации, ухудшении экологической или эпидемиологической обстановки. Идеально, если человек ежегодно будет проходить профилактическое вирусологическое обследование. В экстренных случаях анализ назначается при пожелтении кожи, тяжести и распирании в правой подреберной зоне, непереносимости жира.

Чтобы анализ не имел ложноположительного ответа, надо соблюдать несложные требования. Для диагностики болезни применяют стандартное биохимическое исследование крови. Для этого материал забирается утром – с 8 до 11 часов. Важно, чтобы кровь сдавалась натощак: для этого последний прием еды должен быть минимум за 8 часов до анализа.

Накануне обследования категорически запрещен прием любого вида алкогольных напитков. Не рекомендуются интенсивные физические нагрузки. Следует избегать эмоциональных напряжений и стрессов. Питьевой режим накануне обследования не предусматривает никаких ограничений. За несколько часов до теста не допускается курение: оно повышает риск ложноположительного ответа.

От анализа крови надо воздерживаться, если было инфекционное заболевание. Желательно повторить анализ через несколько недель. При приеме обязательных медпрепаратов следует предупредить врача, чтобы он учитывал это обстоятельство при получении ложноположительного ответа.

Разновидности исследований методом ПЦР

Анализ методом полимеразной цепной реакции имеет определенные преимущества:

1. При таком исследовании проводится определение самого вируса, а не продуктов его жизнедеятельности. При этом существует возможность определить вид возбудителя.
2. Методика обладает высокой специфичностью благодаря тому, что исследуется только определенный участок ДНК, уменьшается вероятность получения ошибочных результатов.
3. Имеет очень высокую чувствительность, определяется даже минимальное количество вируса в крови.

Существует два основных метода исследования крови на гепатит С при помощи ПЦР: качественный и количественный анализ ПЦР. Качественный метод используется для определения факта наличия вируса. Всем у кого в крови были обнаружены антитела к гепатиту, проводится такой анализ. Результат может быть только двух типов: «обнаружено» и «не обнаружено», последнее значение считается нормой.

Положительный результат теста означает, что в образце были найдены фрагменты РНК вируса, что, в свою очередь, говорит о том, что человек был инфицирован гепатитом. В случае негативного результата возможны два варианта: инфицирования не было или его концентрация настолько мала, что не обнаруживается данной методикой.

Количественный метод отличается по сути исследования, по его задачам и по показаниям. Не все больные гепатитом проходят такой анализ. У него, как и у любого другого, существуют определенные цели. Определение вирусной нагрузки или количественный анализ ПЦР на РНК вируса используется:

• для определения РНК вируса в крови и постановки диагноза «вирусный гепатит»;
• для прогнозирования хронизации гепатита и течения болезни;
• для мониторинга противовирусного лечения и принятия решения о его продлении, сокращении или об изменении тактики лечения.

Исследование проводится при наличии таких показаний:

• гепатит С обнаружен при качественном исследовании и в крови обнаружены антитела;
• при микст-гепатитах;
• если планируется проведение противовирусной терапии;
• во время и после лечения от гепатита С;
• при наличии хронического и острого гепатита С.

Тест проводится для оценки количества единиц вируса в заданном объеме образца крови 1 см³ или 1 мл. Результаты приводятся в цифрах. Показатели используются: МЕ/мл, что означает международная единица на миллилитр и копии на мл, количество копий РНК в 1 мл образца. Чем выше количественный показатель анализа, тем большая вероятность передачи вируса другому человеку.

Р-ДНК — метод разветвленной ДНК. Более простой и недорогой метод. Используется для большего количества образцов, имеет невысокую чувствительность, от 500 МЕ/мл. При такой чувствительности есть вероятность не определить вирус, даже если он присутствует в крови.

ТМА — метод транскрипционной амплификации. Такая методика обнаруживает в крови нуклеиновые кислоты. Имеет невысокую стоимость и при этом высокую чувствительность, от 5–10 МЕ/мл. Относительно новая методика, позволяющая ускорить и удешевить процесс тестирования.

Результаты количественного анализа определение РНК вируса, представленные лабораторией, расшифровываются следующим образом:

Source:

Преимущества ПЦР-анализа

Во-первых, это метод ранней диагностики, который позволяет выявить генетический материал вируса. ИФА-анализ способен определить только вырабатываемые организмом в ответ на инфекцию вещества (иммуноглобулины). С момента заражения гепатитом С до начала иммунного ответа может пройти несколько недель и даже месяцев, и в этот период ИФА-анализ неэффективен. ПЦР-анализ уже на первой неделе инфицирования дает ответ.

Второе преимущество ПЦР-анализа — низкая вероятность ошибки. При исследовании определяют характерный только для одного вида возбудителей участок генетического материала, что дает возможность исключить ложный результат. ИФА-анализ показывает наличие антител, которые выделяются против разных вирусов (перекрестные антитела).