Анализ крови расшифровка количественный пцр к гепатиту с

Способы диагностирования заболевания

Определение такой страшной болезни — задача не из легких хотя бы потому, что на ранних стадиях гепатит никак себя не проявляет. Чаще всего для диагностирования врачи обращаются к следующим методикам:

• внешний осмотр и опрос пациента;
• ПЦР-анализ крови на наличие или отсутствие молекулы РНК гепатита;
• биохимический и общий анализ крови;
• анализ на маркеры заболевания;
• УЗИ брюшной полости, с помощью которого удается заметить изменения в состоянии внутренних органов;
• биопсия печени с забором ткани с помощью специальных методик.

На поздних стадиях развития недуга заметить признаки вирусного заболевания несложно, ведь кожные покровы обретают желтушный цвет, человека постоянно беспокоит боль в области правого подреберья, может возникнуть асцит. Однако на этой стадии излечение уже невозможно: болезнь давно перешла в хроническую стадию, а значит, она вот-вот обернется циррозом или язвой.

Определять болезнь нужно как можно раньше, но тут возникают проблемы. Вирус не сразу начинает оказывать негативное влияние на печень, и еще несколько месяцев орган может работать бесперебойно. На этой стадии биохимический анализ может не показать существенных изменений, и даже биопсия порой не дает результатов.

Спасением для пациента становится анализ ПЦР на гепатит, с помощью которого удается определить количественные показатели, сделав выводы о наличии или отсутствии заболевания. Главное достоинство этого анализа состоит в том, что он очень точен и может показать наличие или отсутствие вируса уже через 10–14 дней после заражения. На этой стадии велик шанс приостановить развитие болезни, не допустив ее прогресса в хроническую стадию.

Как подготовится к сдаче анализа?

Заболевания различной этиологии, поражающие печень человека, называются гепатитами, которые подразделяются на вирусные и невирусные.

• Вирусные гепатиты представляют собой инфекционную группу заболеваний.
• К невирусным причисляют аутоиммунные, лучевые и токсические формы болезни.

Гепатиты бывают острыми, хроническими и диффузными, то есть затрагивающими целиком весь орган.

Для точной диагностики гепатита, при наличии либо отсутствии характерной симптоматики, пациентам в обязательном порядке назначается сдача крови на антитела.

Алгоритм подготовки к сдаче анализа крови на гепатит достаточно прост

• Предпочтительно сдавать кровь утром натощак. Это означает, что последний приём пищи перед анализом должен быть за 8 часов и более до него.
• Есть вариант забора крови днём и вечером. В этом случае покушать следует за пять-шесть часов до исследования.
• С утра и до момента сдачи крови нельзя пить ни чая, ни кофе, ни соков, можно пить только чистую питьевую воду.
• За двое суток до исследования нужно исключить из рациона жирную и жареную пищу, а также алкогольные напитки.
• Как минимум в течение часа до сдачи крови следует воздержаться от табакокурения.
• Сразу после рентгенографических, ультразвуковых и инструментальных исследований, а также после массажа и физиотерапевтических процедур кровь сдавать не рекомендуется.
• За 24 часа до взятия крови нужно прекратить приём лекарственных препаратов и не допускать больших физических нагрузок, в том числе интенсивного подъёма по лестнице и беговых упражнений. Эмоциональное перевозбуждение также противопоказано.
• Перечень принимаемых больным лекарств, которые нельзя отменить, должен быть указан на бланке направления.
• Четверть часа непосредственно перед анализом следует провести совершенно спокойно.

Утренние часы рекомендуются для сдачи анализов крови по той причине, что в течение дня показатели крови могут значительно изменяться!

Исследование крови на гепатит А проводится при первых признаках заболевания. Антитела к данному вирусу максимально концентрируются в крови в течение тридцати дней. Затем за следующие 12 месяцев их уровень постепенно снижается до нормального.

Кровь на заражение гепатитом С нужно сдавать не раньше, чем через 6 недель с момента предполагаемого инфицирования!

Особенности качественного ПЦР анализ на гепатит С

Из результатов теста будет виден только положительный анализ на гепатит С или же отрицательный, то есть наличие или отсутствия вируса. Если в выводе стоит «обнаружено», значит, вирус есть и продолжает активно действовать. Обозначение «не обнаружено» говорит об отсутствии вируса или его маленьком количестве. При таком показателе следует учитывать то, что аналитическая чувствительность диагностических систем разная и РНК гепатит С все же может находиться в крови, но не проявиться в анализе.

Особо чувствительный метод ПЦР ультра гепатит С выявляет даже в мизерных количествах. Используется гибридизационно-флуоресцентное исследование, которое во много раз выше, чем стандартные системы ПЦР. Метод применяют в нескольких случаях:

• подозреваются скрытые формы гепатита С;
• диагностика ПЦР не подтвердила возбудитель, но антитела есть;
• в случае выздоровления;
• для выявления ранней стадии заражения.

Норма количественного анализа

Нормальным результатом количественного анализа на гепатит С для здорового человека считается полное отсутствие вируса в крови. На это должен указать качественный анализ, он проводится пациентам, у которых обнаружены антитела к вирусу.

Нормой при расшифровке анализов на гепатит С считается — «вирус не обнаружен».

Если количественный анализ с расшифровкой показал результат меньше 400 тыс. МЕ/мл, можно говорить о минимальной концентрации вируса в крови, но не об отсутствии заболевания. Нагрузку более 800 тыс. МЕ/мл определяют как высокую. Однако среди специалистов нет согласия в определении минимальной и максимальной концентраций. Границей считают 400 тыс. МЕ/мл.

Как подготовиться к исследованию

Чтобы расшифровка анализа ПЦР не была ошибочной, необходимо соответствующим образом подготовиться к забору крови. За некоторым исключением правила не отличаются от таковых при других исследованиях.

Необходимо:

• сдавать кровь строго натощак (последний прием пищи за 12 часов до посещения лаборатории);
• процедуру проводить в первой половине дня (как можно раньше);
• в день анализа после пробуждения пить можно только воду; чай, кофе, газированные и/или сладкие напитки, соки и т.д. противопоказаны;
• за 3–5 часов до сдачи крови нельзя курить;
• если невозможно прервать прием каких-либо медикаментов, сообщить названия принимаемых лекарств лаборанту и врачу, который будет интерпретировать полученные данные.

Наличие гепатита С уже подразумевает полный отказ от спиртного и строгую диету (стол №5). Но если анализ проводится на этапе диагностики, за 5–7 дней до забора крови обязателен контроль питания с исключением тяжелых для печени продуктов и алкоголя.

Расшифровка результатов (таблица)

После количественной полимеразной цепной реакции, данные о вирусной нагрузке на печень и организм в целом отображают в бланке. Количество РНК возбудителя выражается как МЕ/мл (международные единицы/миллилитры). Данные обычно выводятся в виде таблицы, в которой представлены:

• норма количественного ПЦР при гепатит С;
• полученный результат;
• другие параметры.

Значения показателей вирусной нагрузки при гепатите С

Показатели отчасти зависят от типа и чувствительности теста. Поэтому расшифровать результат анализа может только доктор, который учитывает все параметры.

Лечащий врач, исходя из результатов анализов, собранного анамнеза, клинических признаков подберёт противовирусную терапию. Интенсивность её будет зависеть от количества найденного генотипа вируса в образце.

Преимущества ПЦР-анализа

При выборе типа биоматериала для диагностики врачи ориентируются на специфику инфекции, на ее излюбленную локализацию. Ведь от того, попадет ли вредоносная ДНК в пробу, зависит то, будет ли получен достоверный результат анализа.

Для ПЦР берутся следующие материалы:

• Мазок или эпителиальный соскоб со слизистых оболочек. Это может быть уретра, влагалище, шейка матки, цервикальный канал, анальное отверстие, ротовая, носовая и даже глазная полость. Мазки наиболее актуальны при диагностике заболеваний, передающихся половым путем. Для взятия мазка или соскоба используются зонды с разными наконечниками;

• Кровь из вены берут, когда нужно обнаружить ВИЧ, гепатит, цитомегаловирус, мононуклеоз или какое-либо заболевание бактериальной этиологии, например, сифилис, холеру или боррелиоз;

• Биологические жидкости (моча, слюна, сперма, мокрота, секрет предстательной железы, желудочный сок, плевральная, суставная, спинномозговая или амниотическая жидкость, а также бронхоальвеолярный лаваж) берутся по показаниям. Например, ПЦР-анализ мокроты используется при диагностике туберкулеза;

• Пунктаты и биоптаты органов и тканей, как правило, берутся при подозрении на онкологию. Исключение составляет биопсия желудка, которую проводят для определения наличия Helicobacter pylori – бактерии, вызывающей гастрит и язвенную болезнь.

Пробы подлежат отправке в амплификатор не позднее, чем через 2 часа после забора, если они находятся в помещении при комнатной температуре. Когда ПЦР-анализ нужно по какой-то причине отложить, пробирки с биоматериалами допустимо оставить в холодильнике на одни сутки при температуре 2 – 8°С. Максимальный срок хранения – 14 дней, но тогда пробы подвергаются глубокой заморозке (-20°С). После оттаивания они должны быть сразу использованы, повторное замораживание запрещено.

Выше мы упоминали о качественной и количественной ПЦР-диагностике, так вот, в первом случае расшифровка результатов не представляет никакой трудности: ответ либо положительный, либо отрицательный. И если условия подготовки, сбора биоматериала, проведения анализа и оценки итогов не были нарушены, то нет и причин сомневаться в достоверности полученных данных.

По-другому дело обстоит в случае с ПЦР количественной. Ее результатом является число, демонстрирующее вирусную нагрузку. Измеряется виремия в МЕ/мл или в копиях/мл, при этом в одной МЕ (международной единице) содержится примерно 4 копии вируса (точную цифру нужно узнавать в лаборатории, проводившей анализ, поскольку оборудование у всех разное).

В некоторых клиниках для большей компактности результатов количественного анализа ПЦР используют записи следующего вида: 3?104 МЕ/мл, 4?110 МЕ/мл, 5?105 МЕ/мл и так далее. Чтобы понять, о какой цифре идет речь, достаточно произвести умножение.

Во-первых, это метод ранней диагностики, который позволяет выявить генетический материал вируса. ИФА-анализ способен определить только вырабатываемые организмом в ответ на инфекцию вещества (иммуноглобулины). С момента заражения гепатитом С до начала иммунного ответа может пройти несколько недель и даже месяцев, и в этот период ИФА-анализ неэффективен. ПЦР-анализ уже на первой неделе инфицирования дает ответ.

Второе преимущество ПЦР-анализа — низкая вероятность ошибки. При исследовании определяют характерный только для одного вида возбудителей участок генетического материала, что дает возможность исключить ложный результат. ИФА-анализ показывает наличие антител, которые выделяются против разных вирусов (перекрестные антитела).

В государственных учреждениях пройти анализ можно бесплатно, требуется только направление от гепатолога или инфекциониста.

Платное исследование доступно во всех крупных городах РФ. На цену влияет тип исследования, используемое оборудование, необходимое для анализа время.

В Москве и Санкт-Петербурге качественный ПЦР-анализ на гепатит С стоит от 600 до 900 рублей, в области — от 300 до 800 рублей.

Количественный ПЦР-анализ на гепатит С стоит от 17000 до 22000 рублей, на гепатит В — от 1200 до 10000 рублей.

Чтобы получить достоверные результаты ПЦР-анализа на гепатит С, надо обращаться только в зарекомендовавшие себя лаборатории. В этом случае вопрос стоимости исследования отходит на второй план.

Преимущества и недостатки метода лабораторной диагностики

Недостатки ПЦР-диагностики немногочисленны:

• высокая стоимость исследования – минимальный пакет только молекулярно-генетических исследований, необходимый при гепатите С стоит порядка 5000 российских рублей, а необходимы и другие тесты;
• определенное оснащение лабораторного комплекса – ПЦР осуществляет только квалифицированный сотрудник на дорогостоящем амплификаторе;
• ограниченная недоступность исследования для пациентов, так как амплификаторы могут позволить приобрести только крупные лабораторные центры;
• техническая погрешность – при использовании низкочувствительной (низкого качества) тест-системы или праймера возможны ложноположительные и ложноотрицательные результаты.

При исследовании методом ПЦР и расшифровке анализа крови на гепатит можно также определить генотип возбудителя заболевания. Всего существует 6 генотипов вируса и большое количество субтипов, однако в нашем регионе распространение получили 1, 2 и 3 генотипы.

Другими преимуществами данного вида диагностики являются:

• высокая точность полученных показателей и низкая вероятность ошибки в них;
• высокий уровень чувствительности к вирусным частицам в крови;
• возможность выявления сразу нескольких возбудителей;
• диагностика болезнетворных внутриклеточных микроорганизмов, обладающих высокой антигенной изменчивостью;
• работа с расшифровкой анализа на гепатит позволяет обнаружить скрытые текущие инфекции.

Лабораторные исследования методом ПЦР

Полимеразная цепная реакция до недавнего времени была лишь экспериментальным методом анализа и не была широко распространена в клинической практике. Принцип методики основан на так называемой амплификации – способности определенного участка генома патогена к многократному копированию.

Это достигается при помощи обязательных компонентов выполнения ПЦР:

• праймера, структура которого практически идентична определенным участкам РНК HCV,
• фермента, обеспечивающего реакцию амплификации.

Сам процесс лабораторного исследования происходит в буферном растворе, в котором содержится фиксированная комбинация катионов и анионов. Таким образом возможно поддержание оптимального для течения ПЦР уровня рН. Набор для проведения ПЦР содержит и протеины, используемые в качестве своего рода «строительного материала» при амплификации.

Структура праймера такова, что он может взаимодействовать только со строго определенным возбудителем. На этом принципе основана специфичность анализа методом ПЦР. Если иммуноферментные серологические исследования зависят от индивидуальных параметров иммунной системы человека, ПЦР направлена исключительно на выявление РНК возбудителя HCV.

Еще одна особенность проведения подобного исследования состоит в том, что расшифровка ПЦР гепатита С возможна как с использованием компьютерных программ (обычно используется, когда необходимо количественно установить содержание вируса в крови) и микроскопических методов. В норме у здорового в плане вирусного поражения печени человека патоген в крови отсутствует. Выявление возбудителя HCV методом ПЦР, будь то качественное либо количественное исследование, однозначно указывает на инфицирование.

Виды тестов

При помощи постановки ПЦР можно не только определить виремию, то есть фактический уровень патогена в кровотоке, но и генотип вируса. Все доступные исследования, выполняемые по такой методике, приведены в таблице.

При гепатите С проводится все три исследования ПЦР. Алгоритм диагностики состоит в следующем:

1. Общие клинические исследования («стандартный набор» – кровь, моча, биохимия и печеночные пробы), дополнительно могут назначать ревматоидные тесты и ряд других анализов при подозрении на аутоиммунные процессы;
2. Серологическое исследование (ИФА) на выявление антител к возбудителю гепатита С. Изначально показан тест Anti-HCV Total.
3. Качественная ПЦР, предназначена для подтверждения результатов ИФА.
4. Количественная ПЦР, выполняется при подтвержденном диагнозе HCV-инфекции.
5. Генотипирование, также проводится при установленном факте заражения.

Если человек желает самостоятельно обследоваться на гепатит С, рекомендуют сдавать ИФА. Дальнейшие обследования проводят в зависимости от полученных результатов. Если ИФА отрицательный и человек не предъявляет никаких жалоб, повторное тестирование проходят через год. Но при наличии симптомов патологии (в том числе и неспецифических, например, сильная слабость, утомляемость, боли в правом подреберье) следует сдать качественную ПЦР.

Нормы веществ в биохимии крови

В целом ситуация складывается неоднозначная. На сегодняшний день у мужчин и женщин в крови содержится разное количество перечисленных составляющих. Человек сдал на гепатит С анализы? Расшифровка (норма веществ) биохимии крови будет такой:

• ферменты печени у мужчин должны содержаться в количестве до 41 МЕ/л, у женщин — до 31 МЕ/л;
• уровень содержания глутамилтранспептидазы щелочной фосфатазы не превышает 150 МЕ/л;
• желтый пигмент в норме — до 27-34 мкмоль/л.

Именно на такие нормы необходимо ориентироваться человеку. При сдаче крови на биохимический анализ в частных клиниках предельные значения нормы обязательно будут указаны непосредственно в результатах.